檢測番茄果實的顏色方法：

1.目測法：只通過肉眼觀察或借助標準比色卡進行比對，對植物葉片、花朵、果實等組織的顏色進行鑒別。此方法易受主觀影響，誤差較大。

2.色差儀測定法：用色差儀測定番茄果實的顏色，獲得L、a、b值。隨機選擇充分成熟的果實，沿果面赤道一周均勻取3個點，得出L、a、b的數值后取平均值。每份材料測定3個果實，每個果實重復測定3次。色差儀的3個讀數分別具有不同的功能：L值反映顏色的明亮程度，0表示黑色，100表示白色；a值反映紅色或綠色物質的濃度，a>0表示顏色偏紅，a<0表示顏色偏綠；b值反映橙色或藍色物質的濃度，b**>0表示顏色偏黃，b**<0表示顏色偏藍。

3.軟件分析法：利用圖像處理技術，對番茄果實的顏色進行自動檢測和顏色分級。這種方法較客觀，但需要專業的圖像處理軟件。

色差儀檢測番茄果皮顏色的研究

經過數百年的人工栽培，西紅柿已經是一種重要的經濟作物，而且紅色是西紅柿最主要的外觀質量指標，并且紅色果實具有較高的營養價值和食用價值。

由于果色是由多個基因調控的，因此如何在番茄果色形成過程中進行精細檢測與分級，是一個亟待解決的科學問題。

果肉色澤是由多個重要的遺傳因子共同決定的，其中一些重要的調控因子如：rs,nor,Gr,Cnr,Nr,hp,t,Del,Aft,atv,Abg等的變異導致了不同的色澤。

西紅柿果皮的色彩比較單一，而且很容易進行分類，通常情況下可以將其分成兩種類型：彩色果皮和無色透明果皮。

彩色果皮對無色果皮具有顯性作用，由SIMYB12基因所控制，在果實的生長過程中，由于SIMYB12基因不能表達，因此不能在果皮中積累類黃酮。

SIMYB12基因在蘋果中的過量表達可使其在蘋果中呈彩色，且具有較強的貯運能力。

果實色澤的鑒別方法有目測和儀表兩種，直觀鑒別法是一種比較典型的、使用方便、基礎簡單的測色方式，它只適合于那些比較簡單的分類。

由于種皮顏色的變化幅度非常大，而且大部分都是連續的，因此直接鑒別法很難受到人類的干擾，很可能會忽視掉某些中間的過渡色，這對于準確的測量、分類和定量的分析是不利的。

儀器測定法則是利用各種設備，把顏色轉化成精確的數值，讓顏色數值化、具體化和可視化，這種方式操作簡單，耗時短，還可以對顏色進行更加準確的測量和分類。

色差儀被用于多種農作物的果皮或果實的色澤的測定，例如櫻桃番茄、黃瓜和辣椒等。

隨著人們生活質量的提升，鮮紅、無色、透明、果皮、果肉的粉色西紅柿的需求量越來越大，但有關其色澤的功能性標志及其精確檢測方法還鮮有報道。

祝光濤課題組前期工作中，首次發現粉果番茄SIMYB12編碼的啟動子前4kbp區域有603bp長片段，該片段將導致該區域的遺傳變異。

在此基礎上，以30個不同品種的番茄為材料，開發相應的基因座，開發相應的基因功能標記。

利用激光光譜法測定果實色澤之間的關聯性，實現對果實色澤的快速、精準識別，并探討果實色澤的判別臨界點。

國內外關于SIMYB12單倍體形態調控果實色澤的研究較少，而基于SIMYB12單倍體形態構建的遺傳多樣性及其在果實色澤形成中的作用機制尚無研究。

在此基礎上，以SIMYB12基因上與果實色澤相關的突變位點為切入點，通過構建可重復使用的、可應用于凝膠阻滯實驗的、可檢測到果實色澤的多個遺傳變異的遺傳變異，從而建立果實色澤的精確、快速的鑒別方法，為果實色澤的遺傳改良及果實色澤的鑒別提供理論依據。

材料與方法

選擇泉州市農業科學研究所收集的30份番茄種質資源為供試材料，包括櫻桃番茄28份和紅色大果番茄2份，命名從編號P1~P30。

參考Saghai-Maroof等人的實驗結果，利用CTAB法對番茄幼苗進行了全基因組DNA的提取，用酶標記法測定DNA的含量。

祝光濤對番茄果實色澤基因SIMYB12進行了分析，發現該基因位于第1對
SL2.40ch01:70935936-70938394bp區間，且該區間前4kbp區域有603bp序列丟失。

當前，番茄參照基因組已經升級至SL4.0，根據SIMYB12基因的最新注釋，從NCBI官網上下載了SIMYB12基因的最新拼接全基因組。

利用序列比較分析，找出SIMYB12基因與其丟失的10kbp的序列，在丟失的603bp的兩邊合適的地方，進行引物設計，使其具有適宜的尺寸。

通過Primer-Blast技術和NCBI技術比較，驗證引物的專一性，并將其提交給生工上海公司，以驗證其專一性。

PCR反應系統（15微升）:1微升的模板DNA,1.5微升的10xbuffer,0.6微升的dNTP,0.6微升的前、后兩個引物0.6微升，0.3微升的TaqDNA聚合酶，10.4微升的ddH_2。

PCR方法：在94℃下進行5分鐘的PCR處理，結果表明在94℃時，30秒時，在58.6℃時，30秒時，在72℃時，延長時間90秒，共35次；在72℃下延長10分鐘。

通過對實驗數據的分析，對各引物的PCR退火溫度進行了相應的調節，得出了最佳的PCR退火溫度。

瓊脂糖電泳法：以1.5%的瓊脂糖為基底，加入1%的gelred核酸染色劑，將DNA放大后的產品放入BerlowGelDoc膠體成像裝置中，對其進行觀測和攝影。

對每個樣品的擴增條帶進行計數，其中較大的條帶用1表示，較小的條帶用3表示，雜合用2表示，而缺少的資料用0表示。

在一個完全成熟的西紅柿中，在一周內以3個點為中心，用色差儀測量出L,a,b,C,h的值，然后求出它們的平均。

每種試材各取3株，每株試材3次，五種色差計的測定結果有各自的含義：L代表黑白通道，0表示黑色，100表示白色。a代表紅綠通道，a>0表示顏色偏紅，a<0表示顏色偏綠，b代表黃藍通道，b>0表示顏色偏黃，b<0表示顏色偏藍。

C是指色澤的飽和性或純凈性，較高的色度性表示色澤較亮，h是一種色彩角度，它是指三種基礎色和它們之間的一種過渡色，0度代表著純紅色，120度代表著純綠色，240度代表著純藍色。

結果與分析

利用酶標儀，對提取的番茄種質DNA展開了快速檢測，結果顯示樣品濃度OD26m/OD280nm范圍在1.81~1.99，比值低于1.9的樣品有10份。

比值高于1.9的樣品有20份，平均值為1.92，供試的30份番茄種質DNA提取質量均滿足后續常規PCR擴增要求。

從NCBI官網上獲取了番茄最近一期全基因組DNA片段，采用比較分析法，確定了其中603個堿基的缺失區域。

使用Oligo7來設計引物，在SIMYB12的上游丟失序列的區域中，使設計產物擴增碎片的尺寸為200~2000bp，此標記適用于在瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測。

本文以SIMYB12為對象，通過對16對引物進行分析，結果表明其中3對引物的擴增結果均不含丟失的序列，且在擴增結果中存在著碎片尺寸上的差別，不能作為鑒別丟失位置的有效方法。

其中5對引物定位在丟失區域中，能夠以單一的顯性方式檢測到丟失的基因，這5對引物都是顯性的。

除了A-13的擴增片段較大，檢測效果不佳外，其它的都可以很好的檢測到果肉的顏色，但是不能很好的分辨出無色的、透明的果肉和丟失的信息。

在這一區域GC的含量較少，使得PCR很難進行PCR，且通常采用普通的反應系統和熱處理條件。

以P1、P9、P53個材料為供試材料，在不同的退火溫度下，對4對共顯性標記進行了檢測，結果發現A-10的擴增效果最好，最適合的退火溫度是58.6℃，最后將A-10選擇為SIMYB12基因的分子功能標記。